facebook vkontakte livejournal googleplus twitter blogspot linkedin
Vidal Logo About header Search header

РОТА-ИФА ВИЭВ

Описание лекарственного препарата ветеринарного назначения РОТА-ИФА ВИЭВ
основано на официально утвержденной инструкции по применению препарата РОТА-ИФА ВИЭВ для специалистов и утверждено компанией-производителем для издания справочника Видаль Ветеринар 2013 года.
Владелец регистрационного удостоверения: ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Россия)
Лекарственная форма
РОТА-ИФА ВИЭВ
набор компонентов
рег. №: ПВР-1-4.7/02082 от 03.03.2008 - Действующее
Форма выпуска, состав и упаковка

В состав набора входят иммуноспецифические и неспецифические компоненты.
Иммуноспецифические компоненты:
— антиген ротавирусный по 0.2 мл - 1 амп. (фл.) (№1) ;
— антиген отрицательный по 0.2 мл - 1 амп. (фл.) (№2);
— коньюгат антиротавирусный по 1 мл - 2 амп. (фл.) (№3);
— планшет полистироловый 96-луночный, сенсибилизированный ротавирусными иммуноглобулинами, 2 шт. (№9).
Биологические компоненты набора, находящиеся в ампулах (флаконах) №1-№3, представляют собой сухую гомогенную аморфную массу белого цвета с сероватым оттенком.
Неспецифические компоненты:
— 5-аминосалициловая кислота лиофилизированная по 1 мл - 2 амп. (фл.); представляет собой гомогенную аморфную массу фиолетово-коричневого цвета (№4);
— гидроперит лиофилизированный по 1 мл - 2 амп. (фл.); представляет собой порошок белого цвета (№5);
— детергент (твин-20 или твин-80) по 1 мл 1 фл.; вязкая маслянистая жидкость соломенно-желтого цвета (№6);
— фосфатно-буферный раствор 0.01М по 20 мл, 1 фл.; представляет собой прозрачную жидкость (№7);
— натрий хлористый 11.6 г, 1 фл.; представляет собой белый порошок (№8).

Компоненты набора расфасованы в ампулы, запаянные под вакуумом или в стеклянные флаконы, укупоренные резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками, и упакованы в коробки.
На ампуле (флаконе) с каждым компонентом должна быть этикетка с указанием наименования компонента и его номера, объема препарата в ампуле (флаконе), номера серии, даты изготовления.
На каждой коробке набора должна быть этикетка, на которой указано: наименование организации-производителя, адрес и телефон, полное наименование набора, перечень компонентов, входящих в набор, количество ампул (флаконов) каждого компонента, объем компонента в каждой ампуле (флаконе), номер серии, номер контроля, дата изготовления набора (месяц, год), срок годности, условия хранения и обозначение настоящего СТО.
В каждый набор должна быть вложена инструкция по применению набора. Набор рассчитан на анализ 188 проб.

Свидетельство о регистрации № ПВР-1-4.7/02082 от 03.03.08

Фармакологические (биологические) свойства и эффекты

Набор для диагностики ротавирусного энтерита крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа.

Принцип метода заключается в следующем: специфические иммуноглобулины, иммобилизованные на поверхности лунок полистироловой микропанели, связываются с гомологичными антигенами, присутствующими в исследуемом материале, образуя комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с иммуноферментным коньюгатом (специфические иммуноглобулины, меченые пероксидазой хрена), фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. Интенсивность окраски в лунке микропанели пропорциональна содержанию специфического антигена в исследуемой пробе.

Показания к применению препарата РОТА-ИФА ВИЭВ

— диагностика ротавирусного энтерита крупного рогатого скота.

Порядок применения

Подготовка исследуемого материала

Для обнаружения ротавирусного антигена, в качестве испытуемого материала используют фекалии больных телят, а также фрагменты тонкого и толстого кишечника павших животных. Для получения 25-50%-ной суспензии кишечника кусочки материала тщательно измельчают ножницами и растирают в фарфоровой ступке до образования однородной кашицеобразной массы, вносят физиологический раствор. Полученную суспензию промораживают в течение 18-20 ч. при минус 20°С, оттаивают и осветляют центрифугированием при 4000 об./ мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду и используют для исследования.

Подготовка компонентов набора для постановки реакции

Для постановки ИФА необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки разных объемов со сменными наконечниками, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода.

Растворение компонентов реакции проводят на 0.01 М калий-фосфатном буфере (рН 7.2-7.4), для приготовления которого содержимое флаконов № 7 (0.01 М калий фосфатный буфер) и №8 (натрий хлористый) растворяют в 2 дм3 дистиллированной воды и полученный фосфатно-буферный раствор (ФБР) хранят при 4-8°С в течение месяца при
необходимости.

Содержимое ампул со специфическим ротавирусным (№1) и отрицательным (№2) антигенами растворяют в 0.2 см3 ФБР каждую.

Для промывания планшетов и разведения компонентов при постановке реакции готовят содержащий твин фосфатно-буферный раствор (ТФБР): к 2 дм3 ФБР добавляют 1.0 см3 твин-20 или твин-80 (флакон №6) и перемешивают до полного растворения.

Содержимое ампул с иммуноферментным ротавирусным коньюгатом (№3) растворяют в 10 см3 ТФБР.

Субстратную смесь готовят непосредственно перед использованием в реакции следующим образом: содержимое ампулы с 5-аминосалициловой кислотой (№4) растворяют в 10 см3 подогретой до 30-40°С дистиллированной воды, охлаждают и вносят в полученный раствор содержимое ампулы с гидроперитом (№5).

Постановка реакции

На первом этапе реакции во все лунки планшета вносят по 0.1 см3 ТФБР. В первую лунку 1-го ряда плашки вносят 0.1 см3 специфического антигена, в первую лунку 2-го ряда - 0.1см3 отрицательного антигена, а в первые лунки последующих рядов вносят по 0.1см3 исследуемых антигенов и готовят их двукратные разведения, начиная с 1:2 до 1:128 на ТФБР. При качественной реакции (ответ "есть" или "нет") постановку осуществляют аналогично, но материал не титруют, а делают не менее трех повторностей с разведением испытуемой пробы 1:2. Содержимое лунок тщательно перемешивают пипетированием в течение 5-7 сек., инкубируют 1.5-2 ч при 36.5-37.5°С и 3-4 раза отмывают ТФБР лунки плашки от несвязавшихся антигенов.

Содержимое ампулы с иммуноферментным коньюгатом вносят по 0.1 см3 во все отмытые лунки плашек, инкубируют при 36.5-37.5°С 1.5 ч и вновь четырежды отмывают раствором ТФБР.

Затем во все лунки вносят по 0.1 см3 субстратной смеси, которую готовят непосредственно перед использованием в реакции.

Учет результатов

Результаты реакции учитывают через 40-60 мин, проводя измерения оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридере) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм.

На первом этапе вычисляют показатель О.П. каждой испытуемой и контрольной пробы.

Результаты считают достоверными, если О.П. положительного контроля ≥ 0.4, а О.П. отрицательного контроля ≤ 0.2.

Реакцию оценивают по отношению значения О.П. испытуемой пробы (S) к значению О.П. положительного контроля (Р) по формуле:

S/P = О.П. испытуемой пробы × 100/О.П. положительного контроля

Пробу считают положительной, если значение S/P > 48%; если значение S/P < 48% - проба считается отрицательной.

При отсутствии ридера проводят визуальный учет результатов реакции через 40-60 мин по появлению окраски образовавшегося реакционного продукта по сравнению с контролями от коричневого до светло-коричневого цвета:

— интенсивное коричневое окрашивание, коричневое окрашивание - положительный результат;

— светло-коричневое окрашивание - сомнительный результат;

— окрашивание отсутствует или находится на уровне отрицательного контроля - отрицательный результат.

Особые указания и меры личной профилактики

При нарушении целостности и укупорки ампул (флаконов), изменении цвета содержимого, наличии плесени и посторонних примесей во флаконах, при отсутствии этикеток на компонентах набора, а также в случае неиспользования в пределах срока годности, неспецифические компоненты набора выбраковывают, а иммуноспецифические компоненты обеззараживают кипячением в течение 15 мин.

Неиспользованные микропланшеты дезинфицируют в 3% растворе хлорамина. Рабочую поверхность стола и руки обрабатывают 0.5% раствором хлорамина.

Меры личной профилактики

Лица, участвующие в проведении исследований, должны соблюдать правила общей и личной гигиены, надевать халаты, колпаки. Во время работы запрещается принимать пищу, пить воду, курить.

При попадании компонентов диагностикума на открытые участки тела или слизистую оболочку глаз, рта, носа их тщательно промывают водопроводной водой с мылом.

При использовании набора необходимо соблюдать правила техники безопасности. Во избежание порезов осторожно вскрывать ампулы, входящие в набор.

Условия и сроки хранения

Набор следует хранить в сухом, защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре 4-8°С. Срок годности - 12 месяцев.

Утилизация неспецифических компонентов набора не требует специальных мер безопасности.

Если вы хотите разместить ссылку на описание этого препарата - используйте данный код
go to top