facebook vkontakte livejournal googleplus twitter blogspot linkedin
Vidal Logo About header Search header

НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

Описание лекарственного препарата ветеринарного назначения НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
основано на официально утвержденной инструкции по применению препарата НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ для специалистов и утверждено компанией-производителем для издания справочника Видаль Ветеринар 2013 года.
Владелец регистрационного удостоверения: ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Россия)
Лекарственная форма
Форма выпуска, состав и упаковка

По внешнему виду диагностические компоненты наборов представляют собой сухую
гомогенную массу беловато- или розовато-желтого цвета.

Состав:

— антиген коронавирусный по 1 мл - 5 амп. (фл.);
— сыворотка специфическая антигемагглютинирующая по 1 мл - 1 амп. (фл.);
— сыворотка отрицательная (контрольная) по 1 мл - 1 амп. (фл.).

Расфасован в ампулы (флаконы), упакованные в коробки.
На ампулах (флаконах) должны быть этикетки с указанием краткого наименования компонента, объема препарата в ампуле (флаконе), номера серии, даты изготовления (мес, год), активности компонента (титра).
На каждой коробке с набором должна быть этикетка, на которой указано: наименование организации-производителя, адрес и телефон, полное наименование набора, перечень компонентов, входящих в набор, количество ампул (флаконов) каждого компонента, объем компонента в каждой ампуле (флаконе), номер серии, номер контроля, дата изготовления набора (месяц, год), срок годности, условия хранения и обозначение настоящего СТО.

Свидетельство о регистрации № ПВР-1-4.7/02081 от 03.03.08

Фармакологические (биологические) свойства и эффекты

Набор для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинации применяется для обнаружения коронавирусного антигена и антикоронавирусных антител у крупного рогатого скота.

Антиген определяют в пробах фекалий больных, тонкого и толстого отделов кишечника павших с признаками диареи телят.

Обнаружение антител проводят в сыворотках крови коров и телят, молозиве и молоке лактирующих коров.

Принцип метода заключается в способности антигена коронавируса агглютинировать эритроциты белых мышей. Специфическая сыворотка связывает антиген коронавируса, лишая его способности к агглютинации.

Показания к применению препарата НАБОР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
— диагностика коронавирусного энтерита крупного рогатого скота.
Порядок применения

Подготовка исследований

Для проведения реакций необходимы следующие материалы:

фосфатно-буферный солевой раствор (ФБСР), который готовят по следующей прописи:

раствор А - NaH 2PO 4 ×12Н2О - 53.72 г на 1 л Н2О

раствор Б - КН2РО4 - 20.42 г на 1 л Н2О

раствор В - NaCl - 8.59 г на 1 л Н2О

Для приготовления ФБСР с рН 7.2-7.4 смешивают 430 см3 раствора А, 119 см3 раствора Б и 500 см3 раствора В.

Раствор Альсевера используют для консервирования крови и готовят по следующей прописи:

глюкоза - 24.6 г

натрий лимоннокислый - 9.6 г

натрий хлористый - 5.1 г

вода дистиллированная до 1200 см3.

Для приготовления растворов используют реактивы по чистоте не ниже "чистые для анализа" (чда).

Раствор Альсевера разливают по флаконам и стерилизуют в водяной бане по 30-40 мин три дня подряд. К одной части крови добавляют 10 частей консерванта. Консервированная кровь пригодна для получения эритроцитов в течение 10-12 сут со дня ее получения.

0.5-0.8%-ную суспензию эритроцитов мышей готовят следующим образом: кровь от мышей берут в раствор Альсевера путем тотального обескровливания животных. Затем необходимое количество крови центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об./мин. Осадок эритроцитов отмывают трижды ФБСР. Из отмытых эритроцитов готовят 0.5-0.8%-ную суспензию.

Для исследования используют жидкую часть фекалий от больных телят и надосадочную жидкость после центрифугирования 50%-ной суспензии фекалий или кишечника на ФБСР. Кусочки кишечника тщательно измельчают ножницами и растирают в фарфоровой ступке до образования однородной кашицеобразной массы. К полученной суспензии кишечника, а также густым фекалиям добавляют равный объем ФБСР, экстрагируют в течение 3-4 ч при температуре 4-5°С и осветляют центрифугированием при 4000 об./мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду и используют для исследований.

Испытуемые сыворотки крови получают от переболевших телят и их матерей в количестве 4-5 см3 и используют в нативном виде или консервируют добавлением антибиотиков или мертиолята (1:10000).

Сыворотки крови без консерванта хранят в замороженном состоянии.

Сыворотку молозива и молока получают после обработки их сычужным ферментом, для чего в пробирку с 2-5 см3 молозива или молока на кончике скальпеля добавляют 1-2 кристалла сычужного фермента, пробирки помещают в термостат на 1-2 ч и после этого образовавшуюся сыворотку отделяют центрифугированием в течение 5-7 мин при 2000 об./мин.

Сыворотки крови, молозива и молока, а также контрольную и специфическую сыворотки из набора перед исследованием обрабатывают эритроцитами мышей, для чего к 0.25 см3 сыворотки добавляют 0.25 см3 10%-ной суспензии эритроцитов, выдерживают до полного оседания эритроцитов и используют в реакции. Таким образом, перед использованием в реакции сыворотки оказываются разведенными 1:2.

Все компоненты набора перед использованием разводят в 1 см3 дистиллированной воды. В последующем все необходимые разведения рабочих растворов готовят на фосфатно-буферном солевом растворе.

Реакции ставят микрометодом в объеме 0.025 см3 (1 капля), используя полистироловые панели с U-образным дном.

Реакции можно ставить и макрометодом (в 0.2 см3) на панелях из плексигласа.

Обнаружение коронавируса в фекалиях

Коронавирусный антиген в фекалиях обнаруживают в реакции гемагглютинации, которая основана на способности коронавируса вызывать агглютинацию эритроцитов мышей. Эта реакция позволяет обнаружить вирус в материале от больных и павших животных.

Реакцию торможения гемагглютинации в данном случае используют для подтверждения специфичности РГА (т.е. подтверждения принадлежности гемагглютининов именно коронавирусу).

Для постановки этой реакции в первый ряд лунок панели вносят по 0.025 см3 отрицательной (контрольной) сыворотки, во второй - по 0.025 см3 специфической антигемагглютинирующей сыворотки, разведенных 1:20 ФБСР. Затем в первые лунки обоих рядов вносят по 0.025 см3 испытуемого антигена из фекалий или кишечника, приготовленных по схеме, описанной выше, перемешивают и делают двукратные разведения, затем ставят на инкубацию на 1 ч. По истечении этого срока во все лунки обоих рядов панели вносят по 0.025 см3 0.8%-ной суспензии эритроцитов, перемешивают и оставляют на 1 ч.

Реакция считается положительной, если титр гемагглютининов в исследуемом материале составил 1:32 и выше, и специфическая сыворотка тормозит гемагглютинацию в исследуемом материале не менее чем на 4 разведения (в 16 раз), т.е. если титр гемагглютининов в первом ряду с отрицательной сывороткой составил 1:128, то во втором ряду со специфической антигемагглютинирующей сывороткой он должен быть не выше 1:8.

Выявление антител к коронавирусу в сыворотках крови, молозиве и молоке

Для выявления антител в сыворотках крови, молозиве и молоке используют реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). основанную на способности специфических антител тормозить гемагглютинирующую активность вируса.

Постановка РТГА включает два этапа: определение рабочей дозы антигена и постановка основного опыта.

Вначале определяют рабочую дозу антигена (4АЕ), для чего проводят титрование антигена в РГА. Для этого во все лунки панели вносят по 0.025 см3 ФБСР и делают двукратные разведения специфического антигена. Затем во все лунки вносят по 0.025 см3 0.8%-ной суспензии эритроцитов.

Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контрольных лунках, которые содержат по 0.025 см3 ФБСР и 0.8%-ной суспензии эритроцитов. Учет проводят по четырехкрестовой системе. За гемагглютинирующий титр антигена принимают наибольшее его разведение, которое вызывает агглютинацию эритроцитов не менее чем на ++.

Затем показатель титра антигена в РГА деляг на 4. Так, если титр антигена 1:256, то рабочее разведение будет составлять 1:64 (4АЕ).

Перед постановкой основного опыта определяют правильность выбора 4 АЕ.

Для этого в 5 лунок раскапывают по 0.025 см3 ФБСР, а затем титруют рабочую дозу антигена. Таким образом, в первой лунке будет 2 АЕ, во второй - 1 АЕ, в третьей - 0.5 АЕ. После этого в каждую лунку добавляют по 0.025 см3 0.8%-ной суспензии эритроцитов, панели встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 60 мин.

При правильном выборе рабочей дозы (4АЕ) агглютинация должна быть только в первой и второй лунках. Если в третьей лунке оказывается полная или частичная агглютинация, это означает, что выбранная доза антигена содержит больше 4 АЕ и должна быть уменьшена. Если во второй лунке, где должна быть 1 АЕ антигена, агглютинация не полная, то выбранная рабочая доза содержит меньше АЕ в 0.025 см3 и должна быть увеличена.

Уменьшение или увеличение рабочей дозы антигена проводят добавлением соответственно ФБСР или антигена и повторно проверяют.

Для постановки основного опыта в ряд лунок панели разливают по 0.025 см3 ФБСР. В первую лунку вносят 0.025 см3 испытуемой сыворотки и делают двукратные разведения ее до 1:256. После этого во все лунки панели вносят по 0.025 см3 рабочего разведения антигена (4АЕ). После часового контакта сыворотки с антигеном во все лунки добавляют по 0.025 см3 0.8%-ной суспензии эритроцитов.

Реакцию учитывают через 60 мин. За титр сыворотки принимают наибольшее ее разведение, которое тормозит агглютинацию эритроцитов с коронавирусным антигеном не менее чем на ++.

Контролями реакции служат результаты взаимодействия специфической и контрольной сывороток с коронавирусным антигеном, для чего эти сыворотки титруют как испытуемые.

Сыворотку считают положительной, если ее титр 1:32 и выше.

Особые указания и меры личной профилактики

По окончании работы ампулы (флаконы), инструменты, остатки неизрасходованного материала обеззараживают кипячением в течение 15 минут. Рабочую поверхность стола и руки обрабатывают дезинфицирующим раствором (0.5%-ный раствор хлорамина).

Меры личной профилактики

Лица, участвующие в проведении исследований, должны соблюдать правила общей и личной гигиены, надевать халаты, колпаки. Во время работы запрещается принимать пищу, пить воду и курить. При попадании компонентов диагностикума на открытые участки тела или слизистую оболочку глаз, рта, носа их тщательно промывают водопроводной водой с мылом.

Условия и сроки хранения

Набор следует хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре 4-8°С. Допускается хранение при любой минусовой температуре. Срок годности - 2 года.

Разведенные антиген и сыворотки сохраняют активность в течение года при условии хранения их при - 20°С. Разведенные препараты должны храниться в пенициллиновых флаконах под резиновыми пробками.

Если вы хотите разместить ссылку на описание этого препарата - используйте данный код
go to top